RNA干擾技術服務簡介

 

RNA干擾（RNA interference, RNAi）是指在進化過程中高度保守的、由雙鏈RNA（double-stranded RNA，dsRNA）誘發的、同源mRNA高效特異性降解的現象。當細胞中導入與內源性mRNA編碼區同源的雙鏈RNA時，該mRNA發生降解而導致基因表達沉默，是一種特異性的轉錄后基因沉默(post-transcriptional gene silencing and transgene silencing)。由于RNAi具有高度的序列專一性和有效的干擾，可以特異地將特定的基因沉默，從而獲得基因功能喪失或基因表達量的降低。RNAi技術可廣泛應用到包括基因功能，藥物靶點篩選，細胞信號傳導通路分析等研究中。一般可將RNAi分成三類：siRNA、microRNA、shRNA.

慢病毒載體具有感染譜廣泛、可以有效感染分裂期和靜止期細胞、長期穩定表達外源基因等優點，因此成為導入外源基因的有力工具?，F在慢病毒系統已經被廣泛應用到各種細胞系的基因過表達、RNA干擾、以及活體動物實驗中。

 

技術優勢

由本公司經驗豐富的研究人員利用慢病毒構建shRNA載體，可以高效穩定的運送進實驗室常見的細胞系，并且也可用于感染傳統轉染試劑難以轉染的細胞系如原代細胞、懸浮細胞和處于非分裂狀態的細胞，并且在感染后可以整合到受感染細胞的基因組，進行長時間的穩定表達。

 

技術難點

由于實驗涉及短發夾RNA（shRNA）的設計以及慢病毒的包裝，實驗步驟復雜繁瑣，容易出現問題的環節比較多，特別是病毒包裝過程中要注意的生物安全問題。慢病毒包裝由本公司多年慢病毒包裝經驗的博士研究人員負責。

 

服務信息

服務項目	收費標準	實驗周期
基于慢病毒的shRNA構建	詢價	視具體情況而定
細胞穩定株篩選	詢價	視具體情況而定

客戶提供：沉默基因的種屬、名稱或者將目的基因的mRNA序列發給我們；如需要建立基因沉默后穩定細胞株篩選，需提供相應的靶細胞系。

公司提供：電子版實驗報告及相關制品。

 

實驗案例

說明：構建的慢病毒Raptor shRNA、Rictor shRNA、S6K1 shRNA、4E-BP1 shRNA感染SH-SY5Y和PC12細胞沉默細胞Raptor、Rictor、 S6K1、4E-BP1表達

 

說明：構建的慢病毒Raptor shRNA、Rictor shRNA、S6K1 shRNA、4E-BP1 shRNA感染Daudi和WEHI-231細胞沉默細胞Raptor、Rictor、S6K1、4E-BP1表達

 

CRISPRs/Cas9基因組編輯服務

 

CRISPR/Cas9（Clustered regularly interspaced short palindromic repeats）是基因組編輯（genome editting）領域重要的突破。是在Cas9 DNA切割酶與sgRNA（small guidance RNA）共同作用下，將基因組進行定點改變的技術，主要應用于建立穩定的knockout細胞系，動物模型，用于疾病通路、藥物作用機理等方面的研究。

 

技術優勢

本公司具有多名熟練操作CRISPR/Cas9基因組編輯的博士研究人員，能夠為您提供專業方便的基因組編輯服務。

 

技術難點

由于實驗涉及gRNA的設計以及慢病毒的包裝，實驗步驟復雜繁瑣，容易出現問題的環節比較多，特別是病毒包裝過程中要注意的生物安全問題。慢病毒包裝由本公司多年慢病毒包裝經驗的博士研究人員負責。

 

服務信息

服務項目	收費標準	實驗周期
CRISPRs/Cas9質粒構建	詢價	2周左右
體外轉錄sgRNA	詢價	2周左右
慢病毒包裝	詢價	視具體情況而定
在靶細胞中進行敲除效果分析	詢價	視具體情況而定
建立knockout細胞系	詢價	視具體情況而定

客戶提供：

1、請將需敲除基因的DNA序列和靶位點發送給我們，我們會根據您的實驗要求，與您確認實驗方案并指導您提供樣品。

2、我們免費為您設計gRNA，通常建議您一次合成2-3個。

3、進行CRISPRs/Cas9質粒構建，若需要使用特殊載體，請您提供、質粒量≥5 μg。

公司提供：電子版實驗報告及相關制品。

 

實驗案例

說明：CRISPR/Cas9編輯敲除Ulk1的PC12細胞