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      項目與服務  Project Service
      首頁 > 靶基因干擾

      RNA干擾技術服務簡介

       

      RNA干擾(RNA interference, RNAi)是指在進化過程中高度保守的、由雙鏈RNA(double-stranded RNA,dsRNA)誘發的、同源mRNA高效特異性降解的現象。當細胞中導入與內源性mRNA編碼區同源的雙鏈RNA時,該mRNA發生降解而導致基因表達沉默,是一種特異性的轉錄后基因沉默(post-transcriptional gene silencing and transgene silencing)。由于RNAi具有高度的序列專一性和有效的干擾,可以特異地將特定的基因沉默,從而獲得基因功能喪失或基因表達量的降低。RNAi技術可廣泛應用到包括基因功能,藥物靶點篩選,細胞信號傳導通路分析等研究中。一般可將RNAi分成三類:siRNA、microRNA、shRNA.

      慢病毒載體具有感染譜廣泛、可以有效感染分裂期和靜止期細胞、長期穩定表達外源基因等優點,因此成為導入外源基因的有力工具?,F在慢病毒系統已經被廣泛應用到各種細胞系的基因過表達、RNA干擾、以及活體動物實驗中。

       

      技術優勢

      由本公司經驗豐富的研究人員利用慢病毒構建shRNA載體,可以高效穩定的運送進實驗室常見的細胞系,并且也可用于感染傳統轉染試劑難以轉染的細胞系如原代細胞、懸浮細胞和處于非分裂狀態的細胞,并且在感染后可以整合到受感染細胞的基因組,進行長時間的穩定表達。

       

      技術難點

      由于實驗涉及短發夾RNA(shRNA)的設計以及慢病毒的包裝,實驗步驟復雜繁瑣,容易出現問題的環節比較多,特別是病毒包裝過程中要注意的生物安全問題。慢病毒包裝由本公司多年慢病毒包裝經驗的博士研究人員負責。

       

      服務信息

      服務項目 收費標準 實驗周期
      基于慢病毒的shRNA構建 詢價 視具體情況而定
      細胞穩定株篩選 詢價 視具體情況而定

      客戶提供:沉默基因的種屬、名稱或者將目的基因的mRNA序列發給我們;如需要建立基因沉默后穩定細胞株篩選,需提供相應的靶細胞系。

      公司提供:電子版實驗報告及相關制品。

       

      實驗案例

      說明:構建的慢病毒Raptor shRNA、Rictor shRNA、S6K1 shRNA、4E-BP1 shRNA感染SH-SY5Y和PC12細胞沉默細胞Raptor、Rictor、 S6K1、4E-BP1表達

       

      說明:構建的慢病毒Raptor shRNA、Rictor shRNA、S6K1 shRNA、4E-BP1 shRNA感染Daudi和WEHI-231細胞沉默細胞Raptor、Rictor、S6K1、4E-BP1表達

       

      CRISPRs/Cas9基因組編輯服務

       

      CRISPR/Cas9(Clustered regularly interspaced short palindromic repeats)是基因組編輯(genome editting)領域重要的突破。是在Cas9 DNA切割酶與sgRNA(small guidance RNA)共同作用下,將基因組進行定點改變的技術,主要應用于建立穩定的knockout細胞系,動物模型,用于疾病通路、藥物作用機理等方面的研究。

       

      技術優勢

      本公司具有多名熟練操作CRISPR/Cas9基因組編輯的博士研究人員,能夠為您提供專業方便的基因組編輯服務。

       

      技術難點

      由于實驗涉及gRNA的設計以及慢病毒的包裝,實驗步驟復雜繁瑣,容易出現問題的環節比較多,特別是病毒包裝過程中要注意的生物安全問題。慢病毒包裝由本公司多年慢病毒包裝經驗的博士研究人員負責。

       

      服務信息

      服務項目 收費標準 實驗周期
      CRISPRs/Cas9質粒構建 詢價 2周左右
      體外轉錄sgRNA 詢價 2周左右
      慢病毒包裝 詢價 視具體情況而定
      在靶細胞中進行敲除效果分析 詢價 視具體情況而定
      建立knockout細胞系 詢價 視具體情況而定

      客戶提供:

      1、請將需敲除基因的DNA序列和靶位點發送給我們,我們會根據您的實驗要求,與您確認實驗方案并指導您提供樣品。

      2、我們免費為您設計gRNA,通常建議您一次合成2-3個。

      3、進行CRISPRs/Cas9質粒構建,若需要使用特殊載體,請您提供、質粒量≥5 μg。

      公司提供:電子版實驗報告及相關制品。

       

      實驗案例

      說明:CRISPR/Cas9編輯敲除Ulk1的PC12細胞

       

       

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